Оптимізація методу отримання незрілих дендритних клітин

Abstract

У роботі представлений метод виділення мононуклеарів з кісткового мозку у градієнті «тразографу», який дає змогу отримати більш ніж 40 % клітин, серед яких 28 % – CD14+-моноцити. Підібрана мінімальна панель фенотипічних маркерів для оцінки незрілих дендритних клітин у культурі in vitro. В порівняльному аспекті продемонстровано, що більш адекватним джерелом отримання дендритних клітин є мононуклеари на відміну від загальної суспензії клітин кісткового мозку. Встановлено, що диференціювання мієлоїдних попередників і моноцитів у незрілі дендритні клітини супроводжується втратою CD14-антигена, мінімізацією рівня експресії костимуляторної молекули СD86 і появою характерного для цих клітин маркера CD11b-антигена. Результати дослідження дають змогу не тільки оцінити якісні характеристики отриманих дендритних клітин і їх толерогенну активність на моделі аутоімунних захворювань в експерименті, а також намітити перспективи створення їх запасів у низькотемпературних банках для клінічного використання. _________________________________________________________________________________________ The method of isolation of bone marrow mononuclear cells in «trasograph» gradient, enabling to obtain more than 40 % of cells, among those 28 % were CD14+-monocytes has been presented. The minimum set of phenotype markers to assess immature dendritic cells in vitro has been selected. In a comparative aspect it has been shown that the most adequate sources of obtaining of dendritic cells are mononuclear cells in contrast to total cell suspension of bone marrow. It has been found that the differentiation of myeloid progenitor cells and monocytes into immature dendritic cells was accompanied with the loss of CD14 antigen , minimization of expression rate of co-stimulatory molecule CD86 and appearance of CD11b-antigen marker, which is the feature of these cells. The results allow not only to estimate the qualitative characteristics of the obtained dendritic cells and their tolerogenic activity in the model of autoimmune diseases, but also to underline the perspectives of establishing their stocks at low temperature banks to be used in clinics.