Экспериментальная оценка эритротоксического действия различных доз пищевой добавки е407а методом проточной цитометрии.

Abstract

В настоящее время в научной среде наблюдается активная дискуссия в отношении необходимости регуляции содержания пищевых добавок Е407 (очищенный каррагинан) и Е407а (полуочищенный каррагинан) в продуктах питания. Данные добавки широко используется из-за своих гидроколлоидных свойств в качестве загустителей. В то же время, экспериментальные и даже клинические данные указывают на токсичность каррагинанов. Целью работы было изучение эритротоксичности пищевой добавки Е407а при непосредственном воздействии в различных концентрациях. Образцы крови 8 крыс-самок популяции WAG собирали в вакутейенеры, содержащие ЭДТА, и горизонтально инкубировали в 10 мл среды RPMI-1640 со стабильным глутамином (Biowest, Франция), натрий-фосфатным буфером при pH 7,4 (контрольные образцы) и полуочищенным каррагинаном в концентрациях 1, 5 и 10 мг/мл. Инкубация длилась 24 часа. После инкубации, к суспензии 2 мкл промытых эритроцитов с натрий-фосфатным буфером добавляли рабочий раствор 2',7'-дихлордигидрофлуоресцеина диацетата (H2DCFDA, Invitrogen TM , США) с конечной концентрацией АФК (активные формы кислорода)-чувствительного красителя равной 10 мкМ. Суспензии клеток инкубировали в течение 30 мин в темноте. Клетки дважды промывались с целью удаления остатков H2DCFDA. Образцы анализировали на проточном цитометре BD FACSCanto™ II (BD Biosciences, США) с регистрацией средней интенсивности флуоресценции дихлорфлуоресцеина (DCF). Критерий Крускала-Уоллиса с последующим расчетом критерия Данна применяли для сравнения числовых значений показателей средней интенсивности флуоресценции (MFI) DCF четырех независимых групп. H2DCFDA широко используется для определения внутриклеточного содержания АФК. При попадании в клетку H2DCFDA деацетилируется эстеразами и при взаимодействии с АФК превращается в DCF, интенсивность флуоресценции которого пропорциональна содержанию АФК в клетке. Исследование показало, что при использовании низких доз полуочищенного каррагинана (1 и 5 мг/мл)