Використання та удосконалення органотипового культивування як перспективного об'єкта для дослідження лікарських препаратів.

Abstract

Вступ. Використання органотипового культивування має переваги перед використанням таких об’єктів, як клітинна культура та цілісний організм. Наявність фізіологічно-нормального мікрооточення клітин при органотиповому культивуванні представляє більш повну картину того, що відбувається з клітинами органу при функціональній цілісності клітинних систем. Наявність цілісність клітинних систем важлива для тих тканин органів, що не функціонують у вигляді окремих клітин. Органотипове культивування дозволяє проводити функціональні дослідження при застосуванні ліків та отримувати повний спектр впливу лікарських препаратів на клітинні системи. Використання та удосконалення способів отримання органотипових культур є актуальним. Мета дослідження – відбір та удосконалення методів отримання органотипових культур як перспективного об’єкту в фармакології. Матеріали та методи. Одержання слайсів за допомогою вібратому для органотипового культивування вироблялося з органів мишей лінії BALB/c. Виявлялися найбільш оптимальні концентрації агарози для заливки органів з можливістю мінімізувати кількість отримання непридатних слайсів для подальшого культивування. Проводився підбір необхідної товщини зрізу для різних органів зі зберіганням цілісності клітинних систем та можливості ефективної оцінки (скринінгові методи, світлова мікроскопія) функціонування цих систем. Результати та їх обговорення. Виявлено, що для отримання більшої кількості придатних для культивування слайсів необхідним є використання заливки з агарози, а саме 4% гель агарози та застосування низькоплавкої агарози (дозволяє заливати орган при температурі 38°С). Заливка 4% гелем агарози дає змогу отримувати зрізи товщиною від 20 до 500 мкм. Труднощі виникають при отриманні зрізів органів (серце, селезінка), що мають велику кількість сполучної тканини. Товщина, що є оптимальною для отримання слайсів продиктована площею на якій можливим є зберігання цілісності клітинних систем. Після отримання зрізів слід забезпечити їх рівномірний розподіл для однакового забезпечення киснем для життєздатності. Культивування проводиться в базових середовищах, для підтримання різних типів клітин в одному зрізі. Оцінкою цілісності структур слугує світлова мікроскопія, а їх життєздатності оцінюють при забарвленні трипановим синім. Висновки. Органотипове культивування стає більш популярним та перспективним об’єктом для тестування лікарських препаратів, через його критичні переваги в порівнянні з статичними клітинними культурами. Слайси органів печінки, мозку, нирок та пухлин, з оптимальною товщиною зрізу для нормального функціонування клітинних систем.