Модифицирующий эффект конканавалина А и диамида на чувствительность эритроцитов к холодовому шоку

Abstract

Установлено, что температура (0 и 37°) и тоничность среды (0,15—1,20 М NaCl) оказывают влияние на агглютинацию эритроцитов конканавалином А. Обработка клеток лектином не приводит к существенному уменьшению уровня гемолиза эритроцитов при охлаждении. В отличие от конканавалина А диамид в концентрации выше 2,0 мМ вызывает снижение чувствительности клеток к холодовому шоку. Изменение чувствительности эритроцитов к охлаждению в интервале 37—0° коррелирует с изменением электрофоретического спектра белков мембраны. После обработки диамидом отмечалось прогрессирующее уменьшение интенсивности спектриновых полос с одновременным формированием высокомолекулярных белковых агрегатов, не входящих в гель. Эффект диамида зависит от тоничности среды, при которой производится обработка клеток, что особенно выражено в гипертонических средах с концентрацией NaCl 0,8—1,2 М. В указанных условиях агрегация спектрина была максимальной. Указывается, что в основе механизма гипертонического холодового шока эритроцитов лежит усиление ассоциации периферических белков скелета с плазматической мембраной в осмотически обезвоженных клетках, что ограничивает способность липидов адаптироваться в процессе охлаждения и приводит к стабилизации дефектов в структуре мембраны, формирующихся при низкой температуре. Диамид может устранять эти неблагоприятные изменения, вызывая диссоциацию периферических белков от цитоплазматической поверхности мембраны при агрегации последних.--------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------The temperature (0 degrees C and 37 degrees C) and the medium tonicity (0.15-1.20 M NaCl) were shown to affect erythrocyte agglutination by concanavalin A. Treatment of cells with lectin caused no significant decrease in the erythrocyte hemolysis upon cooling. Diamide, unlike concanavalin A used at concentrations above 2.0 M decreases the cell sensitivity to the cold shock. The changes in the erythrocyte susceptibility to cooling within the temperature range of 37-0 degrees C correlate with changes in the electrophoretic spectrum of membrane proteins. The progressive decrease in the spectrin bands intensity with a simultaneous formation of high molecular weight protein aggregates not included in the gel composition was observed after diamide treatment. The diamide effect depends on the medium tonicity, at which the treatment was performed, being especially well pronounced in hypertonic media with 0.8-1.2 M NaCl concentrations, the maximal spectrin aggregation being observed under these conditions. It is suggested that the main factor of the mechanism underlying the erythrocyte hypertonic cold shock is the increase in the association of peripheral cytoskeleton proteins with plasma membrane in osmotically dehydrated cells which limits the ability of lipids to adapt during cooling and results in the stabilization of defects in the membrane structure at low temperatures. Diamide eliminates these unfavourable changes eventually resulting in the dissociation of peripheral proteins from the cytoplasmic surface of the membrane on the protein aggregation.