Влияние условий криоконсервирования на фенотипический профиль и иммуномодулирующую активность клеток фетальной печени

Abstract

Исследовано влияние условий криоконсервирования (концентрация криопротектора диметилсульфоксида – ДМСО, скорость охлаждения в различных температурных интервалах) на енотипический профиль и иммуномодулирующую активность клеток фетальной печени (КФП) крыс 14 суток гестации. Клетки замораживали по двум режимам под защитой 7,5; 10 и 12,5% ДМСО. Определяли фенотипический профиль КФП (CD34 + СD38 – , Sca-1 + CD34 – , Sca-1 + CD34 + , CD44 – CD73 + , CD44 + CD73 + ), их цитоморфологические показатели, количество и изнеспособность. Разработанный в данной работе режим криоконсервирования КФП обеспечивал сохранность в гетерогенной популяции клеток с иммуномодулирующей активностью, которую оценивали в системе in vivo на модели экспериментального атопического дерматита (ЭАД). Экспериментально установлена эффективность применения криоконсервированных КФП по режиму 1 (1 град/мин до –25°С; 5-минутная стабилизация при –25°С и погружение в жидкий азот) с 10% ДМСО для восстановления показателей крови и снижения интенсивности кожных воспалительных реакций у крыс с индукцией ЭАД. ______________________________________________________________________________________________ Досліджено вплив умов кріоконсервування (концентрація кріопротектору диметилсульфоксиду − ДМСО, швидкість охолодження в різних температурних інтервалах) на фенотипічний профіль та імуномодулюючу активність клітин фетальної печінки (КФП) щурів 14 діб гестації. Клітини заморожували за двома режимам під захистом 7,5; 10 і 12,5% ДМСО. Визначали фенотипічний профіль КФП (CD34 + СD38 – , Sca-1 + CD34 – , Sca-1 + CD34 + , CD44 – CD73 + , CD44 + CD73 + ), їх цитоморфологічні показники, кількість та життєздатність. Розроблений у даній роботі режим кріоконсервування КФП забезпечував збереження в гетерогенній популяції клітини з імуномодулюючою активністю, яку оцінювали в системі in vivo на моделі експериментального атопічного дерматиту (ЕАД). Експериментально встановлено ефективність застосування кріоконсервованих КФП за режимом 1 (1 град/хв до −25°С; 5-хвилинна стабілізація при −25°С і занурення в рідкий азот) з 10% ДМСО для відновлення показників крові та зниження інтенсивності шкірних запальних реакцій у щурів із індукцією ЕАД. ________________________________________________________________________________________________ The eff ect of cryopreservation conditions (concentration of dimethyl sulfoxide cryoprotectant, cooling rate in diff erent temperature ranges) on phenotypic profi le and immunomodulating activity of rat fetal liver cells (FLCs) of 14 days of gestation was investigated. The cells were frozen according to two regimens under protection of 7.5; 10, and 12.5% dimethyl sulfoxide. We evaluated the phenotypic profi le of FLCs (CD34 + СD38 – , Sca-1 + CD34 – , Sca-1 + CD34 + , CD44 – CD73 + , CD44 + CD73 + ), their cytomorphological indices, number and viability. The FLCs cryopreservation regimen developed in this work provided the preservation in a heterogeneous cell population with immunomodulating activity, evaluated in vivo in the model of experimental atopic dermatitis (EAD). The effi ciency of using FLCs cryopreserved according to the regimen 1 (1 deg/min to –25°С; stabilization at –25°С for 5 min and plunging into liquid nitrogen) with 10% DMSO to restore blood counts and reduce the intensity of dermal infl ammatory reactions in rats with the induced EAD was experimentally established.